Heparina biotina
Se recogió heparina biotinilada, se liofilizó y se utilizó para la fabricación de chips SA. La heparina biotinilada se inmovilizó en el chip de estreptavidina-SA según el protocolo del fabricante. La inmovilización exitosa de la heparina se confirmó al observar un aumento en el RU de la unidad de resonancia en el chip sensor. Después de demostrar que la heparina puede prevenir eficazmente la modificación de residuos críticos para su unión, el siguiente paso fue demostrar que estos residuos podrían marcarse eficientemente, biotinilarse, después de la disociación de la proteína del azúcar. Fig. 1, FGF acetilado en ausencia o presencia de perlas de heparina y tampón. Se describe un ensayo de afinidad de solución basado en resonancia de plasmón superficial para medir la K d de la unión de heparina-heparán en proteínas de unión a sulfato con una variedad de ligandos. En el ensayo, se pasa una solución preequilibrada de proteína y ligando sobre un chip sensor en el que se ha inmovilizado heparina. Chips sensores de heparina La heparina, un polisacárido sulfatado de la familia de los glicosaminoglicanos, exhibe numerosas actividades biológicas importantes asociadas con su interacción con diversas proteínas. La heparina se usa ampliamente como fármaco anticoagulante debido a su capacidad para acelerar la velocidad a la que la antitrombina inhibe las serina proteasas. Se pasó una solución de conjugado de heparina-biotina sobre el flujo del chip sensor Neutravidina-PEG, ml en tampón de ejecución HBS-EP, caudal 5 µl min. Se determinó la unión de la heparina-biotina al flujo del chip sensor. observando la reacción RU confirmada en el flujo. También se examinó la complejación de la biotina por su influencia en la unión de la heparina. Sin embargo, incluso a concentraciones de biotina de mg ml suficientes para saturar la avidina, no hubo ningún efecto sobre los datos de unión de heparina (no mostrado). Descargar: Descargar imagen en tamaño completo Figura 5. Especificidad y dependencia del tamaño de la interacción avidina-heparina. El conjugado de heparina-biotina se preparó haciendo reaccionar sulfo-NHS-LC-biotina con los grupos amino libres de residuos de glucosamina no sustituidos en heparina. Se pasó una solución de conjugado de heparina-biotina (ml) en tampón HBS-EP sobre el flujo del chip sensor Neutravidin-PEG, caudal 5 μl/min, T 25 °C, tampón de funcionamiento: HBS-EP.